tcep 溶液,0.5m(tcep solution)操作步骤 获得含重组表达质粒的表达1、 将连接产物转化大肠dh5α,根据重组载体的标志(抗amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多,重复亚或亚至不同酶切位点。3、 以此重组质粒dna转化表达宿主菌的感受态细胞。---表达1、 tcep 溶液,0.5m(tcep solution)挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml lb(含amp50μg/ml)中37℃过夜培养。2、按1∶50比例稀释过夜菌,增塑剂tcep多少钱,一般将1ml菌加入到含50mllb培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至od600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。3、取部分液体作为未---的对照组,余下的加入iptg---剂至终浓度0.4mm作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%sds重悬,混匀, 70℃10min。5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做sds-page等分析。





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二硫键是2个巯基被氧化而形成的?s?s?形式的硫原子间的共价键,在蛋白质分子的立体结构形成上起着一定的重要作用。为了确定蛋白质的一级结构,首先必须将二硫键打开,使之成为线状多肽链。tcep还原二硫键是一个定量反应的过程,其原理是其中心原子“p”所带的孤电子对能与氧原子形成配位共价结合而具有还原性。tcep无色、无味、易溶于水,在空气和水溶液中具有较高的稳定性,受温度和浓度的影响小;反应活性温和、毒性小,容易操作,还原能力强,作用可以维持2~3周。tcep对还原二硫键选择性极强,除半胱氨酸外,几乎没有与其它---酸的副反应,并且能在酸性条件下使用,有效减少---键的水解。是被---的hao的二硫键的还原试剂。


tcep 溶液,0.5m(tcep solution)操作步骤(一)获得目的基因1、通过pcr方法:以含目的基因的质粒为模板,绍兴增塑剂tcep,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),pcr循环获得所需基因片段。2、通过rt-pcr方法:用trizol法从细胞或组织中提取总rna,以mrna为模板,逆转录形成cdna链,以逆转录产物为模板进行pcr循环获得产物。(二)构建重组表达载体1、tcep 溶液,0.5m(tcep solution)载体酶切:将表达质粒用---性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收kit或冻融法回收载体大片段。2、pcr产物双酶切后回收,在t4dna连接酶作用下连接入载体。
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